ORDEN DE 27 DE JULIO DE 1983 POR LA QUE SE ESTABLECEN METODOS OFICIALES DE ANALISIS MICROBIOLOGICOS DE AGUAS POTABLES DE CONSUMO PUBLICO.

MarginalBOE-A-1983-21936
SecciónI - Disposiciones Generales
EmisorMinisterio de Sanidad y Seguridad Social
Rango de LeyOrden

Siendo necesaria la determinación periódica de diversos parámetros en el control de la calidad de las aguas potables de consumo público, y dependiendo en muchos casos esta determinación de los métodos de análisis a emplear, parece aconsejable, de una parte, asegurar la defensa del consumidor y de otra, la seguridad jurídica de los administrados que intervienen en el abastecimiento y control de estas aguas.

En consecuencia, de acuerdo con lo dispuesto en el artículo 32 del Real Decreto 1423/1982, de 18 de junio.

Este Ministerio, previo informe del de Agricultura, Pesca y Alimentación, ha tenido a bien disponer:

Artículo único Se aprueban como oficiales los métodos de análisis microbiológicos, que se reseñan en el anexo de la presente Orden, para el control de las aguas potables de consumo público.

Madrid, 27 de julio de 1983.- LLUCH MARTIN.

ANEXO QUE SE CITA

  1. TOMA DE MUESTRAS DE AGUAS PARA ANALISIS MICROBIOLOGICO

    1.1 Objeto.

    Es obtener una muestra representativa del agua para poder determinar a partir de ella su calidad microbiológica de interés sanitario.

    La toma de muestra debe respetar, por consiguiente, la composición microbiana del agua captada.

    1.2 Ambito de aplicación.

    Estas normas se aplicarán a todos los tipos de aguas, cualquiera que sea su procedencia, ya sean de grifos, pozos, depósitos, lagos, ríos, manantiales, bocas de riego, etc.

    1.3 Tipos de muestras.

    En el caso de análisis bacteriológicos de aguas, la muestra para analizar debe ser siempre simple, sin que se puedan obtener muestras compuestas ni integradas, de modo que la muestra para el laboratorio sea la obtenida en el punto de muestreo.

    1.4 Material.

    Exceptuando el material o aparatos específicos que puedan utilizarse para determinadas tomas especiales, los frascos más adecuados son los de vidrio neutro con tapón esmerilado o roscado, muy limpios y esterilizados en autoclave a 120 C durante treinta minutos o en horno de Pasteur a 180 C durante dos horas.

    También pueden utilizarse frascos de material macromolecular con tapón roscado, esterilizados mediante óxido de etileno, radiaciones gamma u otros sistemas adecuados.

    El tapón y el cuello del frasco se protegerán con una cubierta de papel, papel de aluminio u otro similar.

    Los recipientes empleados han de tener una capacidad mínima de 250 ml, si bien es útil disponer de otros de mayor capacidad cuando la técnica analítica así lo exija.

    1.5 Técnica de muestreo.

    Las operaciones que comporta la toma de muestras varían según la naturaleza del agua a analizar y el punto de muestreo elegido.

    1.5.1 Grifos.

    Una vez retirados filtros u otros accesorios, se procederá a una cuidadosa limpieza con agua o alcohol.

    Con el grifo cerrado se flameará el extremo del mismo, mediante la llama obtenida con un poco de algodón empapado de alcohol y sostenido con unas pinzas o bien una lámpara de soldar.

    Se abrirá el grifo para que el agua fluya abundantemente y se renueve la contenida en la tubería que la alimenta. Se destapará el frasco esterilizado sin tocar la boca del mismo ni el interior del tapón.

    Todos los movimientos deberán realizarse sin interrupciones, al abrigo de corrientes de aire y con las máximas precauciones de asepsia.

    1.5.2 Pozos y depósitos.

    Si se dispone de bomba de captación se opera como se ha indicado en el caso del grifo.

    Si no existe sistema de bombeo, no es posible obtener una muestra representativa.

    Con esta salvedad se introducirá en la masa de agua el frasco de muestreo o un cubo lo más limpio posible sostenidos con una cuerda y tomando la muestra tras haber agitado la superficie del agua con el mismo recipiente.

    También podrán utilizarse aparatos especiales lastrados que permiten introducir el frasco esterilizado y destaparlo a la profundidad deseada. En estos casos deberán utilizarse frascos con tapón a presión.

    1.5.3 Lagos, ríos.

    En ríos o cursos de agua será preciso considerar diversos factores, tales como: profundidad, caudal, distancia a la orilla, etc. La muestra se tomará lo más lejos posible de la orilla, procurando no remover el fondo y evitando los remansos o zonas de estancamiento.

    Para tomar una muestra del agua de un lago o de un río se sujetara el frasco por el fondo en posición invertida, sumergiéndolo completamente y dándole la vuelta en sentido contrario a la corriente (río) o desplazándolo horizontalmente en la dirección de la boca del frasco (lago).

    1.5.4 Manantiales.

    En manantiales naturales o fuentes de caudal continuo, sin dispositivos de intermitencia se tomará la muestra directamente sin adoptar medidas especiales de drenaje.

    1.5.5 Bocas de riego.

    Para el muestreo en bocas de riego se utilizarán acoplamientos especiales que permitan operar como en el caso de un grifo.

    En todos los casos la muestra de agua no deberá llenar totalmente el trasco, siendo necesario dejar un espacio interior a fin de facilitar su homogenización en el momento de iniciar los análisis.

    1.6 Volumen de la muestra. El volumen a tomar debe ser el adecuado para que en una sola muestra se puedan efectuar simultáneamente la totalidad de los análisis bacteriológicos y estará en función de la técnica analítica a utilizar.

    Para los análisis que utilicen la técnica del NMP se tomarán como mínimo 250 ml y para los que empleen la de membranas filtrantes, como mínimo, 500 ml.

    1.7 Cerrado y precintado.

    Las muestras se cerrarán convenientemente y se precintarán, en su caso, de forma que quede garantizada su inviolabilidad.

    1.8 Rotulación.

    Antes de la toma de la muestra se marcará el frasco mediante rotulador resistente al agua, con una referencia que permita su identificación. En todo caso la muestra se acompañará de una ficha o etiqueta en la que se consignen los datos necesarios que, como mínimo, serán los siguientes:

    1.8.1 Datos del solicitante:

    Nombre de la persona o Entidad y dirección completa.

    1.8.2 Datos del agua:

    Origen de la muestra (pozo, manantial, grifo, cisterna, río, etcétera).

    Denominación y/o referencia.

    Dirección o emplazamiento exactos, término municipal y provincia.

    Fecha y hora de la captación.

    1.8.3 Otros datos:

    Consignar si el agua es natural o está sometida a algún tratamiento de depuración (cloro, filtración, carbón activo, etc.).

    Identificación de la persona que ha tomado la muestra.

    1.9 Acondicionamiento y conservación.

    Una vez tomada la muestra se acondicionará de modo que quede en la oscuridad, debiendo remitirse cuanto antes al laboratorio. Es conveniente iniciar el análisis antes de que transcurran seis horas desde la toma de la muestra.

    Sin embargo, podrá demorarse su análisis hasta veinticuatro horas cuando haya sido conservada en refrigeración a + 4 C (más o menos 2 C).

    1.10 Precauciones especiales.

    Cuando se estime probable que el agua a analizar contenga trazas de cloro, cloraminas u ozono, será necesario neutralizar su efecto bactericida en el momento del muestreo.

    Para ello, antes de la esterilización del frasco, se le añadirá una cantidad suficiente de tiosulfato sódico. Para un volumen de 250 ml son suficientes 0,2 ml de una solución acuosa al 3 por 100 de tiosulfato sódico cristalizado (S203Na2 5H20).

    Esta solución puede añadirse sistemáticamente a todos los frascos, ya que en caso de que el agua no contenga cloro, la presencia de tiosulfato a estas concentraciones no posee efectos nocivos sobre el contenido bacteriano del agua.

    1.11 Personal.

    Las tomas de muestras para análisis bacteriológicos de aguas deberán ser realizadas por personas debidamente adiestradas.

  2. BACTERIAS AEROBIAS

    2.1 Definición.

    Son todas las bacterias heterótrofas, aerobias y anaerobias facultativas, mesófilas y psicotróficas capaces de crecer en un medio de agar nutritivo.

    2.2 Fundamento.

    Se basa en contar el número de colonias desarrolladas en una placa de medio de cultivo sólido, al que se ha sembrado un volumen conocido de agua, transcurrido un tiempo y una temperatura de incubación determinados.

    2.3 Material y medio de cultivo.

    2.3.1 Material.

    Placas de Petri de 90 a 120 mm de diámetro, estériles.

    Pipetas graduadas en ml, divididas en décimas, estériles.

    Estufa regulada a 37 C (más o menos 1 C).

    Estufa regulada a 22 C (más o menos 2 C).

    2.3.2 Medio de cultivo.

    Preparación del agar nutritivo.

    Peptona bacteriológica, 5 g.

    Extracto de carne, 3 g.

    Agar, 15 g.

    Agua destilada. 1.000 ml.

    Disolver los componentes por calentamiento hasta punto de ebullición y disolución total del agar, evitando la formación de espuma.

    Ajustar el pH y repartir a razón de 15 a 20 ml en tubos de ensayo.

    Esterilizar en autoclave a 121 C durante quince minutos.

    El pH final del medio deberá ser 8,9-7.1.

    2.4 Bacterias aerobias a 37 C.

    2.4.1 Procedimiento.

    Tomar tantos tubos de medio de cultivo como placas se vayan a emplear.

    Fundir totalmente el medio, colocando los tubos en baño maría.

    Dejar a temperatura a 45 C, aproximadamente.

    Homogeneizar perfectamente la muestra de agua, agitando el frasco repetidas veces.

    Mediante pipeta estéril, depositar en placa de Petri 1 ml del agua a analizar.

    Si se han efectuado diluciones se procederá del mismo modo con cada una de ellas.

    En vez de la dilución 1/10, podrá sembrarse directamente 0,1 ml del agua problema.

    Verter el medio contenido en cada tubo, manteniendo a 45 C, sobre el agua depositada en cada una de las placas de Petri.

    Agitar suavemente mediante movimientos circulares y de traslación para homogenizar la mezcla, sin dejar de apoyarlas sobre la mesa de trabajo.

    La agitación debe prolongase, aproximadamente, un minuto, procurando no mojar los bordes ni la tapa de la placa.

    El tiempo transcurrido desde que se deposita el agua en la placa hasta que se agrega el medio no debe ser superior a diez minutos

    Dejar solidificar, invertir las placas y colocarlas en la estufa.

    Incubar a 37 C (más o menos 1 C) durante cuarenta y ocho horas.

    2.4.2 Lectura y expresión de...

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